液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗。
液相工作者接觸zui多的是流動(dòng)相，也就是流動(dòng)相，是造成液相色譜各種問(wèn)題的zui主要源頭。
液相色譜儀zui常見(jiàn)的故障一是堵，二是漏。下面我們來(lái)談一下“堵”的情況。（注：流動(dòng)相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）
“堵”的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，zui主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來(lái)源就是細菌。
“堵”的原因之一：配制流動(dòng)相時(shí)細菌污染
首先，我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過(guò)濾處理，直接使用沒(méi)有問(wèn)題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統zui前端的過(guò)濾頭上排除，真正容易引起問(wèn)題的，是水中的細菌。
新制備的純水在室內放置幾天就會(huì )長(cháng)菌，而這些細菌雖然肉眼不可見(jiàn)，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡(jiǎn)單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：
（1）的方式當然是購買(mǎi)實(shí)驗室純水機，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。*的缺點(diǎn)就是價(jià)格不菲。
（2）成箱購買(mǎi)市售品牌純凈水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實(shí)驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開(kāi)一支即可，也很方便。每次成本2元左右。
※這里特別指出一個(gè)細節：在絕大多數書(shū)本上，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì )談到zui后有一個(gè)過(guò)濾的步驟。但是從我們長(cháng)期使用的實(shí)際效果來(lái)說(shuō)，只要能保證水的質(zhì)量，這一步*可以也應當去除。
原因有以下三點(diǎn)：
（1）流動(dòng)相過(guò)濾在理論上有好處，但是，實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專(zhuān)瓶，反而容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動(dòng)相影響更大。
（2）流動(dòng)相過(guò)濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買(mǎi)一套過(guò)濾裝置要6000多元，且過(guò)濾器*是比較容易損壞的設備。zui主要是過(guò)濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過(guò)濾片的成本會(huì )遠遠高于色譜柱的成本。
（3）流動(dòng)相過(guò)濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過(guò)濾器有一個(gè)預清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過(guò)程，至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。
（4）在實(shí)際工作未發(fā)現流動(dòng)相不過(guò)濾會(huì )對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時(shí)間沒(méi)有做過(guò)流動(dòng)相過(guò)濾的工作，但是和國內同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長(cháng)的。
“堵”的原因之二：使用流動(dòng)相時(shí)的細菌污染。
指的是：
流動(dòng)相剛開(kāi)始沒(méi)有長(cháng)菌，在使用時(shí)卻產(chǎn)生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習慣造成的。
舉zui簡(jiǎn)單的例子：
50％的甲醇水流動(dòng)相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
從單純實(shí)驗效果來(lái)說(shuō)，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡(jiǎn)單，不需要實(shí)驗者另個(gè)計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時(shí)間重復性*的實(shí)驗效果。
但是，它有一個(gè)致命的缺陷，就是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間就會(huì )長(cháng)細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是肥料，細菌長(cháng)得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗都要用新制備的純水，更要求在每次實(shí)驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會(huì )遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
所以，寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復性，也不要用純水溶液作為流動(dòng)相的一組。從實(shí)際實(shí)驗效果來(lái)說(shuō)，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過(guò)不同比例甲醇水的細菌總數實(shí)驗，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以*殺菌了），這樣可以有效排除長(cháng)細菌的隱患，既可作流動(dòng)相，也可沖柱。就算是在配制流動(dòng)相時(shí)會(huì )計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
“堵”的原因之三：不適當操作。
常見(jiàn)問(wèn)題的有以下幾種：
（1）在更換零件時(shí)選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
（2）樣品處理液凈化得不干凈，長(cháng)期會(huì )在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動(dòng)六通閥時(shí)，有些人可能由于手勁小的原因，轉動(dòng)的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過(guò)警戒值。
（4）在使用金屬管路作出廢液管時(shí)，應當注意廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實(shí)驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時(shí)可能在出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見(jiàn)，但卻的確發(fā)生過(guò)。
“堵”的原因講了不少，現介紹查堵的方法。
在發(fā)生“堵”的現象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數情況下，整個(gè)系統只會(huì )有一個(gè)地方發(fā)生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開(kāi)，仔細觀(guān)察壓力數值，如果某一個(gè)部件（柱子除外）裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過(guò)換同樣規格的柱的壓力是否一致來(lái)判斷。
