液相色譜儀操作（二）

 　　液相色譜儀操作

　　二、過(guò)濾

　　任何顆粒物進(jìn)入液相色譜系統后都會(huì )在柱子入口端被篩板擋住，zui后的結果是將柱子堵塞，表現出的特征是系統壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過(guò)濾設計，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統中，從而延長(cháng)儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數據的可靠性。在HPLC系統中，顆粒物的主要來(lái)源有三個(gè)途徑：流動(dòng)相、被測樣品和儀器系統部件的磨損物。

　　1、流動(dòng)相

　　如果流動(dòng)相均由 液相色譜 級溶劑組成，流動(dòng)相沒(méi)有必要過(guò)濾。這是因為液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈、甲醇等，在制造的工藝過(guò)程中都已經(jīng)過(guò)了0.2μm微孔濾膜過(guò)濾。同樣的，無(wú)論你是買(mǎi)的HPLC級的水還是在實(shí)驗室使用超純水凈化系統制備的水，zui后一步也是通過(guò)0.2μm微孔濾膜。然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如磷酸鹽，流動(dòng)相過(guò)濾將是必要的一個(gè)步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質(zhì)，例如在蓋試劑瓶的塑料內蓋時(shí)，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會(huì )產(chǎn)生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能*溶解了，但是少量雜質(zhì)顆粒存在于流動(dòng)相中成為殘渣。

　　流動(dòng)相通過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾對于從流動(dòng)相中除去所有顆粒物是一個(gè)有效方法。0.2μm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個(gè)應用而言并不比0.45μm微孔濾膜更有效，而且它的過(guò)濾速度會(huì )更慢，特別是當實(shí)驗室使用的試劑和水的質(zhì)量不太好時(shí)。建議實(shí)驗室在編寫(xiě)制定他們流動(dòng)相制備標準操作程序（SOPs）時(shí)規定，可以借鑒上同類(lèi)實(shí)驗室的規定，即：

　　流動(dòng)相制備僅采用HPLC級液體時(shí)不需要過(guò)濾，反之所有流動(dòng)相組成在使用前必須過(guò)濾。

　　在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端入口采用下沉式過(guò)濾器（常見(jiàn)材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個(gè)過(guò)濾器的規格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代流動(dòng)相過(guò)濾步驟，但是它能除去系統中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。

　　2、被測樣品

　　液相系統中的第二個(gè)顆粒物來(lái)源是被測樣品。一些實(shí)驗室在將他們的樣品放置在自動(dòng)進(jìn)樣器盤(pán)（或手動(dòng)進(jìn)樣）以前，所有樣品都先通過(guò)一個(gè)0.45μm針筒式過(guò)濾器過(guò)濾。這是一個(gè)有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個(gè)過(guò)程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過(guò)濾器就不可能100%得到通過(guò)過(guò)濾器的被測樣品，總會(huì )有或多或少的丟失。丟失來(lái)自這樣幾方面：過(guò)濾器濾膜的吸附、過(guò)濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過(guò)濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過(guò)濾后液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個(gè)問(wèn)題一般需要通過(guò)實(shí)驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過(guò)濾器的使用是一種消耗，每個(gè)過(guò)濾器的價(jià)格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時(shí)，由于基質(zhì)大多比較復雜，所以過(guò)濾這步已成為*的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測每一組樣品會(huì )帶一個(gè)外標、一個(gè)添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要zui終檢測時(shí)得到的信噪比能滿(mǎn)足檢出限要求，可將這步視為系統誤差而忽略。

　　3、儀器系統部件的磨損物

　　zui后，在液相系統中顆粒物的另一個(gè)主要來(lái)源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

　　*種建議認為，在一般實(shí)驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗室應基于上述觀(guān)點(diǎn)制定定期預防性維護計劃。該觀(guān)點(diǎn)認為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來(lái)的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動(dòng)相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過(guò)濾器清洗或更換的間隔。

　　另一種建議則認為，原裝密封墊的密封效果，更換以后容易引起流動(dòng)相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

　　兩種說(shuō)法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。

　　自動(dòng)進(jìn)樣器旋轉軸的密封隨著(zhù)使用時(shí)間也會(huì )磨損，但是在我的經(jīng)驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動(dòng)進(jìn)樣器系統有計數進(jìn)樣閥轉動(dòng)次數的功能，你可以設定一個(gè)警鈴當預設閥轉動(dòng)次數已達到時(shí)提醒你。曾有一種說(shuō)法，進(jìn)樣器zui多轉動(dòng)20,000次，這僅僅是進(jìn)樣10000個(gè)；但這似乎不是實(shí)驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們的實(shí)際使用壽命會(huì )更長(cháng)。旋轉軸密封磨損后會(huì )滲液，比較明顯的特征是同一樣品多次進(jìn)樣后，峰面積值差別比較大（RSD>5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動(dòng)相中，加速對這些部件的損傷。此外，如果你日常運行的流動(dòng)相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會(huì )更快。

　　無(wú)論顆粒物源于何物，實(shí)驗時(shí)都要將其除去。推薦在HPLC系統中采用一個(gè)0.45或0.5μm的在線(xiàn)多孔過(guò)濾器，接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線(xiàn)過(guò)濾，HPLC系統檢測每批樣品開(kāi)始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統將恢復到原來(lái)的壓力值。