1 液相色譜儀系統
液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成。對于整個(gè)系統而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時(shí)也是易出問(wèn)題的主要部位。
2 常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
液相作為一種高精密儀器，如果在使用過(guò)程中不按照正確操作的話(huà)，就容易導致一些問(wèn)題。其中zui常見(jiàn)的就是柱壓?jiǎn)?wèn)題、漂移問(wèn)題、峰型異常問(wèn)題。
2.1 柱壓?jiǎn)?wèn)題 柱壓?jiǎn)?wèn)題是使用液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩定并不是指壓力值穩定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩緩慢的變化是允許的）。壓力過(guò)高、過(guò)低都屬于柱壓?jiǎn)?wèn)題。
2.1.1 壓力過(guò)高 這是液相在使用中zui常見(jiàn)的問(wèn)題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應該分段進(jìn)行檢查。
(1).首先斷開(kāi)真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿(mǎn)液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過(guò)濾頭正常，在檢查；
(2).打開(kāi)Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子，如果壓力沒(méi)有明顯下降，則是過(guò)濾白頭堵塞。處理方法：將過(guò)濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下，過(guò)濾白頭正常，在檢查；
(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現在流動(dòng)相更強的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(cháng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。
2.1.1 壓力過(guò)低 壓力過(guò)低的現象一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點(diǎn)會(huì )導致泵無(wú)法吸上液體。處理方法：打開(kāi)Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
2.2．漂移問(wèn)題 主要包括基線(xiàn)漂移和保留時(shí)間漂移。
2.2.1基線(xiàn)漂移 一般說(shuō)來(lái)，機器剛起動(dòng)時(shí)，基線(xiàn)容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(cháng)下（220nm）平衡時(shí)間相對會(huì )比較長(cháng)，但如果你在實(shí)驗過(guò)程中發(fā)現基線(xiàn)漂移，則你要考慮下面的原因：
1、柱溫波動(dòng)。解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱。
2、流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（斷開(kāi)柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。
3、紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈
4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法：檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
5、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。解決方法：使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
6、檢測器沒(méi)有設定在zui大吸收波長(cháng)處。解決方法：將波長(cháng)調整至zui大吸收波長(cháng)處
7、流動(dòng)相的PH值沒(méi)有調節好。解決方法：加適量的酸或堿調至*PH值
2.2.2保留時(shí)間漂移 保留時(shí)間重現是液相性能好壞的一個(gè)重要標志，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s，超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無(wú)法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：
1、溫控不當。解決方法：調好柱溫，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱。
2、流動(dòng)相比例變化。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障
3、色譜柱沒(méi)有平衡。解決方法：在每一次運行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱
4、流速變化。解決方法：重新設定流速
5、泵中有氣泡。解決方法：、從泵中除去氣泡
2.3 峰型異常問(wèn)題 峰型問(wèn)題是液相的主要問(wèn)題，在做液相過(guò)程中，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區別對待，從主要問(wèn)題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。
1、色譜圖中未出峰。解決方法：系統未進(jìn)樣或樣品分解；泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；檢測器設置不正確；針對以上情況成因作相應調整即可。
2、一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負峰。解決方法：流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
3、所有峰均為負峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學(xué)裝置尚未達到平衡。
4、所有峰均為寬峰。解決方法：系統未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。 、
5、所出峰比預想的小。解決方法：樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問(wèn)題。
6、出現雙峰或肩峰。解決方法：進(jìn)樣量過(guò)大；樣品濃度過(guò)高；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。解決方法：進(jìn)樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強；保護柱或色譜柱污染或失效。
8、拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對樣品進(jìn)行清潔過(guò)濾；調整流動(dòng)相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值；柱內燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼；加在線(xiàn)過(guò)濾器，對樣品進(jìn)行過(guò)濾；死體積或柱外體積過(guò)大，將連接點(diǎn)降至zui低；盡可能使用內徑較細的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護柱，對柱子進(jìn)行再生。
9、出現平頭峰。解決方法：檢測器設置不正確；進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
10、出現鬼峰。解決方法：進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統；樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預處理；流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現配現用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過(guò)濾；盡可能使用HPLC級試劑；流路中有小的氣泡，打開(kāi)Purge閥，加大流速排除。
3 結語(yǔ)
以上內容只是對液相色譜中出現的常見(jiàn)的問(wèn)題進(jìn)行了分析，在故障排除時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素，確定假定因素與問(wèn)題之間的；如果通過(guò)更換組件來(lái)排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費；這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵?？傊?，在使用液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養。
